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PBNA-413對心肌缺血再灌注損傷保護作用機制初探(碩士)

來源:  資料編號:5D187091218  文件類型:  資料等級: %D7%CA%C1%CF%B1%E0%BA%C5%A3%BA5D187091218
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資料介紹

PBNA-413對心肌缺血再灌注損傷保護作用機制初探(碩士)(論文23000字)
摘要
目的:
研究拳參正丁醇提取物(PBNA-413)對大鼠心肌缺血再灌注(I/R)損傷心電圖的影響及對其保護作用的最佳劑量,并從自噬、心肌細胞凋亡及縫隙連接蛋白Cx-43的角度,初步探討拳參有效成分PBNA-413對心肌缺血/再灌注損傷的保護機制。
方法:
將40只雄性大鼠隨機分為5組:假手術組、MI/R模型組,PBNA-43高、中、低(1.0 mg/kg、0.3 mg/kg、0.1 mg/kg)劑量組。通過對大鼠心臟左冠狀動脈前降支進行接渣,至心肌缺血45 min后,恢復血流并持續1 h,復制MI/R損傷模型,并記錄心電圖。各組分別予以不同濃度藥物處理。取部分結扎線以下左心室組織心肌組織,采用實時熒光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測各組大鼠心肌組織Cx-43和p-Cx-43、凋亡相關蛋白B細胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相關X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9及自噬相關蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ的mRNA及蛋白表達。
結果:
結扎大鼠冠狀動脈左前降支后,模型組大鼠心電圖T波及ST段與假手術組比明顯抬高,PBNA-43處理后心肌ST段降低,且呈劑量依賴性,以高劑量的效果最好。與假手術組相比,模型組心肌組織Cx-43 mRNA、p-Cx-43和Cx-43、Beclin-1、LC3Ⅱ、Bcl-2蛋白水平均降低;心肌組織凋亡相關蛋白Bax,Caspase-3及Caspase-9蛋白表達升高。與模型組相比,PBNA-413高劑量組Cx-43 mRNA、p-Cx-43和Cx-43蛋白、Beclin-1、LC3Ⅱ、Bcl-2表達均升高。Bax及Caspase-3和Caspase-9蛋白表達降低,除Caspase-9外,Bax,Bcl-2和Caspase-3的基因水平出現與蛋白類似變化,LC3Ⅱ、Beclin-1的基因水平變化不明顯。

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結論:
PBNA-43可能通過提高縫隙連接通道相關蛋白Cx43的表達及活化,適度促進細胞自噬及抑制細胞凋亡改善缺血/再灌注損傷性心律失常,進而對缺血/再灌注損傷心肌起保護作用。
關鍵詞:拳參正丁醇提取物-413;心肌缺血/再灌注;縫隙連接蛋白43,細胞自噬,細胞凋亡

A preliminary study on the protective mechanism of PBNA-413 on myocardial ischemia reperfusion injury
Abstract
Objectives:
The present study aims to investigate the effect of polygonum bistorta n-butyl alcohol extract (PBNA-413) on electrocardiogram (ECG) of myocardial ischemia reperfusion (I/R) injury and screen the best dosage of PBNA-413 for the protective
function to myocardial ischemia reperfusion injury. This study also preliminarily explores the protective mechanism of PBNA-413 on myocardial ischemia reperfusion injury by the study of myocardial cell apoptosis and autophagy as well asgap connexin Cx-43.
Methods:
40 male rats were randomly divided into 5 groups: the sham operation group, the MI/R model group, the groups with PBNA-43 high, medium and low-dose(1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.1 mg/kg) treatment. The MI/R injury model was established by ligation of the left anterior descending branch of the coronary artery for 45min followed by reperfusion for 1 hour. The ECG was recorded. Each group was treated with different concentration of drugs. The mRNA or protein expression of Cx-43, p-Cx-43, Bcl-2, Bax, Caspase-3, Caspase-9, Beclin-1 and LC3 II in left ventricular myocardium tissue with I/R injury were detected by Real-time PCR and Western blotting.
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Results:
The T wave and ST segment of the ECG in the MI/R model group were significantly higher than those in the sham operation group, but the ST segment decreased after PBNA-43 treatment in dose- dependent manner. Compared with the sham operation group, the mRNA expression levels of Cx-43 in MI/R model group decreased. So did the protein expression levels of p-Cx-43, Cx-43, Beclin-1, LC3Ⅱ and Bcl-2. But the protein expression levels of Bax, Caspase-3 and Caspase-9 in myocardial tissue with I/R injury increased. Compared with the model group, the mRNA expression level of Cx-43 in the group with PBNA-43 high-dose treatment increased. So did the protein expression level of p-Cx-43, Cx-43, Beclin-1, LC3Ⅱ and Bcl-2 in the group with PBNA-43 high-dose treatment. But the protein expression levels of Bax, Caspase-3 and Caspase-9 decreased. Except for Caspase-9, the similar changes were found in mRNA and protein expression level of Bax, Bcl-2 and Caspase-3. There were no significant differences in mRNA expression of LC3 II and Beclin-1 between them.

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Conclusion:
PBNA-43 may promote the autophagy and inhibit cell apoptosis by improving the expression and activation of Cx43, and rectify the arrhythmias that originate from I/R injury, thus effectively protect myocardium from I/R injury
Keywords: PBNA -413; Myocardial ischemia / reperfusion; Connexin 43; Autophagy; Apoptosis

目錄
常用縮寫詞中英文對照表...............................................3
前言.................................................................4
1材料與方法.........................................................5
  1.1主要藥物、儀器和試劑............................................6
1.2主要實驗試劑配制............................................
1.3動物及分組..............................................
  1.4動物模型制備及方法步驟..................................
1.5心肌缺血/再灌注(MI/R)模型制備..............................
1.6PBNA藥物配制及給藥.....................................

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  1.7 Western blot法檢測心肌組織自噬相關蛋白、凋亡相關蛋白及p-cx43/
       Cx43的表達.................................................
   1.7.1取材......................................................
   1.7.2組織蛋白提取...............................................
   1.7.3 BCA法測蛋白濃度...........................................
   1.7.4制備上樣蛋白...............................................
   1.7.5SDS-PAGE凝膠制備...........................................
   1.7.6轉模.......................................................
   1.7.7孵育一抗、二抗、發光.......................................
   1.8 q-PCR法檢測心肌組織自噬相關基因、凋亡相關基因及縫隙連接蛋白
       Cx43的mRNA表達...........................................
   1.8.1組織總RNA提取.............................................
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   1.8.2反轉錄、實時定量PCR的擴增.................................
   1.9 數據處理與統計分析..........................................
2 實驗結果.................................................
2.1 PBNA-43對MI/R大鼠心電圖影響.................................
   2.2 PBNA-43 對MI/R大鼠心肌組織p-Cx43/Cx43表達的影響...........
   2.3 PBNA-43對MI/R大鼠心肌組織自噬相關蛋白表達的影響..........
   2.4 PBNA-43對MI/R大鼠心肌組織凋亡相關蛋白的影響..............
   2.5 PBNA-43對MI/R大鼠心肌組織Cx43mRNA表達的影響..............
   2.6 PBNA-43對MI/R大鼠心肌組織自噬相關........................
   2.7 PBNA-43對MI/R大鼠心肌組織凋亡相關基因表達的影響..........
3 討論...................................................
4 結論.....................................................
5 參考文獻...............................................
6 綜述.................................................... 版權所有56DOC.COM
7 參考文獻................................................
8 個人簡介................................................
常用縮寫詞中英文對照表
英文縮寫    英文名稱    中文名稱
MI/R    Myocardial ischemia/reperfusion    心肌缺血再灌注
LAD    Anterior descending coronary artery    左冠狀動脈前降支
I/R    Ischemia/reperfusion                  缺血再灌注
PBNA    Polygonum bistorlaL n-Butyl alcohol extract    拳參正丁醇提取物
WB    Western Blot    蛋白免疫印跡
SDS    Sodium dodecyl sulfate    十二烷基磺酸鈉
PVDF    polyvinylidene fluoride    聚偏二氟乙烯膜
TBS    Tris buffered solution    Tris緩沖液
APS    Ammonium persulfate    過硫酸銨 內容來自www.2329055.live 咨詢QQ:306826066
DEPC    Diethyl pyrocarbonate    焦碳酸二乙脂
GJ    gapjunction    縫隙連接通道
NS     Normal saline             生理鹽水
SPF    Specific pathogen Free    無特定病原體
SD       Sprague Dawley    SD大鼠
EP      Eppendorf    微量離心管
BCA    Bicinchonininc acid 2    2-聯喹啉-4,4- 二甲酸
RT-PCR    Real-time Polymerase Chain Reaction    實時熒光定量
Cx43    Connexin43    連接蛋白43

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